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骨关节论文范文 骨关节类有关论文怎么撰写8000字

《鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎兔血清与软骨IL6、MMP3的影响》

本文是关于骨关节相关本科论文怎么写与鹿角和壮骨和胶囊和骨关节炎和IL和6和影响类研究生毕业论文范文.

摘 要:目的 探討鹿角壮骨胶囊对膝骨关节炎兔血清及软骨IL-6、MMP-3的影响.方法 采用木瓜蛋白酶右侧膝关节腔内注射诱导建立兔膝骨关节炎模型,将24只长耳大白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,每组8只.正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予鹿角壮骨胶囊灌胃,治疗4周后采用ELISA法检测血清IL-6、MMP-3的含量,免疫组化法检测各组兔膝关节软骨IL-6、MMP-3的表达.结果 模型组、治疗组血清IL-6、MMP-3水平高于正常组,治疗组血清MMP-3水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).模型组和治疗组膝关节软骨IL-6、MMP-3表达高于正常组,治疗组IL-6、MMP-3低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 鹿角壮骨胶囊可通过抑制IL-6、MMP-3等致炎因子的表达起到防治膝骨关节炎的作用.

关键词:膝骨关节炎;鹿角壮骨胶囊;血清;白介素-6;金属基质蛋白酶;关节软骨

中图分类号:R684.3文献标识码:A DOI:10.3969/j.issn.1006-1959.2020.01.020

文章编号:1006-1959(2020)01-0061-03

Effects of Lujiao Zhuanggu Capsule on Serum and Cartilage IL-6 and MMP-3

in Rabbits with Knee Osteoarthritis

LIANG Zi-cong1,2,3,WANG Heng1,HU Xian-yun1,JIANG Yong2,HU Jian-shan2,3,LU Rui-na4,LIU Yun-lin4

(1.Department of Basic Medicine,Qiannan Medical College for Nationalities,Duyun 558000,Guizhou,China;

2.Department of Orthopaedics,Qiannanzhou Traditional Chinese Medicine Hospital,Duyun 558000,Guizhou,China;

3.Department of Traditional Chinese Medicine,Sandu Aishan Hospital,Sandu 558100,Guizhou,China;

4.Qiannanzhou People's Hospital/Department of Ultrasound,the First Affiliated Hospital of Qiannan Medical College,

Duyun 558000,Guizhou,China)

Abstract:Objective To investigate the effects of Lujiao Zhuanggu Capsule on serum and cartilage IL-6 and MMP-3 in rabbits with knee osteoarthritis. Methods The rabbit knee osteoarthritis model was induced by papain injection into the right knee joint city. 24 long-eared white rabbits were randomly divided into normal group, model group and treatment group, 8 in each group. The normal group and the model group were administrated with distilled water. The treatment group was administrated with Lujiao Zhuanggu Capsule. After 4 weeks of treatment, the levels of IL-6 and MMP-3 in serum were detected by ELISA. Expression of IL-6 and MMP-3. Results The serum levels of IL-6 and MMP-3 in the model group and the treatment group were higher than those in the normal group,the difference was statistically significant (P<0.05); the serum MMP-3 levels in the treatment group were lower than the model group,the difference was statistically significant (P<0.05); the expression of IL-6 and MMP-3 in rabbit knee joint cartilage was higher in the model group and the treatment group than in the normal group,the difference was statistically significant(P<0.05); IL-6 and MMP-3 in the treatment group were lower than the model group, the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion Lujiao Zhuanggu Capsule can prevent knee osteoarthritis by inhibiting the expression of IL-6, MMP-3 and other inflammatory factors.

Key words:Knee osteoarthritis;Lujiao Zhuanggu Capsule;Serum;Interleukin-6;Metal matrix protease; Articular cartilage

膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是一种好发于中老年人的慢性退行性骨关节病,临床以关节疼痛、肿胀、僵硬为主要症状[1].KOA发病机制十分复杂,目前研究认为KOA发病与遗传、细胞因子、基质金属酶蛋白酶(matrix metaloprotease,MMPs)降解反应、软骨细胞凋亡等因素密切相关[2].非甾体类抗炎药虽然能改善患者临床症状,但其引起的不良反应也给患者身体带来严重的危害[3].KOA属于中医中的“痹症”范畴,中医药治疗KOA有其独特的优势,不良反应少.鹿角壮骨胶囊是我院研制的中成药制剂,具有补益肝肾、祛风散寒、强壮筋骨的作用,在治疗KOA方面具有较好的疗效.本研究主要探讨鹿角壮骨胶囊对KOA模型兔血清及软骨IL-6、MMP-3的影响,为鹿角壮骨胶囊治疗KOA提供实验支撑.

1材料与方法

1.1实验动物与分组 选取普通级4月龄日本长耳白兔24只,均为雌兔,体质量(2.0±0.5)kg,由长沙天勤生物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(湘)2014-0010.适应性饲养1周,分笼饲养,不限制饮食.按照随机数字表法分为正常组、模型组、治疗组,每组8只.

1.2仪器 JA10002型电子天平(上海精天);DDIL-5型恒温箱(上海安亭);ASP300 S型全封闭式组织脱水机、RM2265型全自动轮转式切片机、HI1210型摊片机、DM750型光学显微镜(德国Leica),MR-96A型酶标仪(深圳迈瑞).

1.3药品与试剂 鹿角壮骨胶囊由黔南州中医医院制剂科提供(批准文号:黔药制2013003号,规格:0.45 g/粒),木瓜蛋白酶(北京索莱宝科技有限公司),IL-6、MMP-3 ELISA试剂盒(北京诚林生物科技有限公司),封闭液(武汉博士德生物工程有限公司),IL-6、MMP-3抗体(北京百奥思科生物医学技术有限公司),通用型SP试剂盒、DAB显色盒(北京中杉金桥生物技术有限公司),4%多聚甲醛、二甲苯、乙醇、脱钙液由黔南州人民医院病理科提供,其余试剂均为国产分析纯.

1.4方法

1.4.1造模 三组分别行腹腔注射麻醉后,右侧膝关节备皮消毒.正常组注射0.5 ml灭菌注射用水.模型组与治疗组分别用针尖在内侧膝眼进针,确认进入膝关节腔,缓慢注射4%木瓜蛋白酶溶液0.5 ml.各组被动屈伸右侧膝关节20次,促进溶液在关节腔内均匀扩散.

1.4.2治疗方法 首次注射后第2周,治疗组给予鹿角壮骨胶囊药粉0.3 g/kg(参照成人和实验动物等效剂量换算[4]),称取体重的相应剂量,用蒸馏水稀释成10 ml后灌胃,1次/d,连续给药4周.正常组、模型组给予10 ml蒸馏水灌胃.

1.5观察指标 比较三组血清IL-6、MMP-3水平及其免疫组化表达.

1.5.1血清IL-6、MMP-3含量检测 末次给药第2天,麻醉处死所有实验动物.股动脉取血,以3000 r/min离心15 min,留取上清液,采用ELISA法以酶标仪检测各组大鼠血清中IL-6、MMP-3水平,严格按照试剂盒说明书操作.

1.5.2免疫组化表达 二甲苯透明脱蜡,修复抗原,PBS冲洗.滴加一抗(稀释浓度:IL-6、MMP-3为1∶200),洗去一抗,滴加二抗,滴加辣根酶标记,DAB显色,复染,封片.光学显微镜下摄片观察.每张切片摄取3个视野(×400).运用Image-Pro Plus 6.0专业图像分析软件分析,计算指标平均光密度值.

1.6统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件进行数据处理.采用Shapiro-Wilk法作正态性检验,符合正态分布的计量资料以(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时选择Tamhane法进行分析.不符合正态分布时选择秩和检验.以P<0.05为差异有统计学意义.

2结果

2.1三组血清IL-6、MMP-3水平比较 模型组、治疗组兔血清IL-6、MMP-3水平高于正常组,治疗组兔血清MMP-3水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1.

2.2三组膝关节IL-6、MMP-3免疫组化表达比较 模型组和治疗组兔膝关节软骨IL-6、MMP-3表达高于正常组,治疗组IL-6、MMP-3低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2、图2.

3讨论

KOA在中医学中有“膝痹”“鹤膝风”之称.《素问·痹论》曰:“风、寒、湿三气杂至,合而为痹也.其风气胜者为行痹,寒气胜者为痛痹,湿气胜为着痹也等以冬遇此者为骨痹.”古代医者强调KOA的发病是由于膝关节遭受了风、寒、湿三邪侵袭,导致人体下肢经络血气受阻,引起膝关节疼痛、肿胀、关节功能障碍等临床症状[5].当代医家结合自身临床经验,提出了对痹症病因病机新的理解.李西海等[6]认为,骨关节炎与创伤性关节炎虽同属中医学中“痹症”范畴,但两者应该区别对待,其中创伤性关节炎主要由外伤、外邪侵蚀等外因引起,而骨关节炎多发生于老年人,无明显的外伤病史,往往是内因引起;KOA病机则为“本萎标痹”,肝肾亏虚是该病发病的核心病机,由于肝肾精血日渐不足,不能濡养筋骨,从而导致慢性肌肉萎缩以及关节活动不利,久而成痹.

现代医学研究认为,KOA的病程离不开炎症反应导致的关节滑膜增生、软骨退变、骨质增生等病理变化.白细胞介素可通过促进各种MMPs的酶原合成、分泌和活性增强,加速基质蛋白多糖、层粘连蛋白等多种基质蛋白的降解[2].MMPs家族能直接降解软骨的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原,导致关节软骨纤维结构遭到破坏,弹性丧失,还能令细胞外基质分解,降低软骨细胞的保护能力,引起软骨细胞死亡[7].本院自制的鹿角壮骨胶囊以鹿角胶为君药,起到补益肝肾、填精益血、强筋壮骨之功;以骨碎补、黄芪、当归、熟地黄为臣药,起到增强君药补益肝肾之功.苏军等[8]认为鹿角胶其取自鹿角,为血肉有情之品,主归肝、肾经,具有补肝肾、益精血的功效,较植物类药物更能发挥补益肝肾之功.有研究證实[9,10],中药骨碎补可调节Bax蛋白、Bcl-2蛋白及凋亡因子Caspase-3,从而起到抑制软骨细胞凋亡的作用,而软骨细胞的凋亡与Bax蛋白和Bcl-2蛋白的基因表达关系密切.Bax是促细胞凋亡基因,是抗细胞凋亡基因,两者作用相反,Bcl-2基因大于Bax基因时,OA软骨细胞的寿命相对延长.黄芪中有效成分包括黄芪多糖、黄芪甲苷等.黄芪多糖对炎症模型细胞所释放的炎症因子IL-6的表达具有抑制作用[11];黄芪甲苷能通过上调ECM-receptor interaction信号通路,发挥拮抗软骨细胞凋亡、降低ECM降解的作用,促使细胞分泌胶原,实现对软骨细胞外基质的修复作用[12].有研究表明[13],当归能抑制大鼠炎症模型关节滑膜与血浆中致炎因子IL-6、MMP-3的表达.本研究结果显示,模型组、治疗组兔血清IL-6、MMP-3水平高于正常组,治疗组兔血清MMP-3水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组和治疗组兔膝关节软骨IL-6、MMP-3表达高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组IL-6、MMP-3低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),说明鹿角壮骨胶囊可以降低兔膝关节血清MMP-3、IL-16的含量,有利于抑制滑膜炎症,抑制软骨细胞的凋亡、降低ECM的降解、促进Ⅱ型胶原的合成、提高蛋白黏多糖的表达.

综上所述,鹿角壮骨胶囊可通过抑制IL-6、MMP-3致炎因子的表达起到防治KOA的作用.

参考文献:

[1]Lane NE,Shidara K,Wise BL.Osteoarthritis year in review 2016:clinical[J].Osteoarthritis and Cartilage,2017,25(2):209-215.

[2]谷艳超,刘世清,夏韶强,等.骨关节炎发病机制和治疗的研究进展[J].中国骨与关节杂志,2016,5(10):770-774.

[3]何方舟,张伟滨.非甾体类抗炎药对中国骨关节炎患者疗效及胃肠道不良反应的Meta分析[J].中华关节外科杂志(电子版),2018,12(1):69-76.

[4]陈主初,吴端生.实验动物动物学[M].第4版.长沙:湖南科技出版社,2001:321.

[5]葛伟韬,高云,刘珍珠,等.膝骨关节炎中医病名辨识[J].中医杂志,2016,57(23):1989-1992.

[6]李西海,刘献祥.骨关节炎的核心病机-本痿标痹[J].中医杂志,2014,55(14):1248-1249,1252.

[7]Blom AB,Lent P,Libregts S,et al.Crucial role of macrophages in matrix metalloproteinase-mediated cartilage destruction during experimental osteoarthritis:involvement of matrix metalloproteinase 3[J].Arthritis& Rheumatology,2010,56(1):147-157.

[8]蘇军,陆永刚,胡建山,等.鹿角壮骨胶囊治疗膝骨性关节炎的疗效观察[J].中药药理与临床,2015,31(2):169-170.

[9]金连峰.单味中药骨碎补对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡作用的实验研究[J].中华中医药学刊,2013,31(7):1699-1703.

[10]金连峰,韩煜.骨碎补对兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡相关因子作用实验研究[J].辽宁中医药大学学报,2013,15(11):42-46.

[11]李冬方,顾宁,黄伟.黄芪多糖对THP-1巨噬细胞HSP60诱导下IL-6、TNF-α表达的影响[J].时珍国医国药,2015,26(12):2830-2832.

[12]罗华丽.黄芪甲苷对骨关节炎保护作用的定量蛋白质组学研究[D].重庆医科大学,2016.

[13]袁立霞.当归拈痛汤及其拆方对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织MMP-3调节作用的实验研究[J].时珍国医国药,2013,24(6):1313-1314.

[12]林嘉辉,陈炳艺,龙美兵,等.龟甲胶和鹿角胶含药血清对豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38 MAPK基因表达的影响[J].中国中医骨伤科杂志,2016,24(10):1-4.

[13]陈炳艺,陈泽华,林嘉辉,等.龟甲胶、鹿角胶调控MKK基因表达促进豚鼠OA软骨细胞增殖的研究[J].中国骨质疏松杂志,2016,22(7):805-808.

收稿日期:2019-11-05;修回日期:2019-11-15

编辑/杜帆

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